Rengøring af ambulancer kræver en balancering af generel køretøjshygiejne med specifikke medicinske sikkerhedskrav; den er typisk opdelt i tre komponenter: udvendig rengøring, indvendig kabine rengøring og desinfektion af medicinsk udstyr. Udvendig rengøring fokuserer primært på at fjerne mudder, støv og forurenende stoffer; dette opnås generelt ved at skylle med vand sammen med et neutralt rengøringsmiddel, mens man strengt undgår brugen af stærkt ætsende kemikalier for at forhindre beskadigelse af køretøjets lak og advarselsmærkater.
I betragtning af at den indvendige kabine tjener som et rum for medicinske procedurer, er rengøringsstandarderne for dette område betydeligt strengere. Umiddelbart efter afslutningen af hver patienttransportmission skal alt affald eller forurenende stoffer i kabinen straks fjernes. Ydermere skal høje-berøringsflader-såsom bårer, sæder, gelændere og gulve-undergå en grundig desinfektion. Dette opnås typisk ved at tørre eller sprøjte disse overflader med desinfektionsmidler, der opfylder etablerede medicinske standarder, og derved sikre effektiv eliminering af bakterier og vira og forhindre krydskontaminering.
Med hensyn til indbygget medicinsk udstyr-såsom patientmonitorer, defibrillatorer og oxygentilførselssystemer-skal specialiserede rengørings- og desinfektionsprocedurer følges i nøje overensstemmelse med protokollerne til administration af medicinsk udstyr. Der skal udvises særlig forsigtighed for at forhindre, at væsker trænger ind i det indre af disse enheder, hvilket kan kompromittere deres korrekte funktionalitet. Derudover skal køretøjet gennemgå periodisk dyb rengøring og omfattende desinfektion; specifikt, efter transport af patienter med infektionssygdomme eller afslutning af missioner, der involverer en høj risiko for kontaminering, skal der udføres strenge terminal desinfektionsprotokoller for at sikre, at køretøjet konsekvent opfylder alle sikkerhedskrav til medicinsk brug.
